實(shí)驗(yàn)十一 DNA的粗提取與鑒定
下面在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過程中,要思考每一操作步驟要達(dá)到什么目的。
在進(jìn)行步驟1時(shí),利用攪拌的5分鐘,做如下提問:
為什么要加蒸餾水?加入蒸餾水后細(xì)胞將會怎樣?
(讓細(xì)胞內(nèi)溶液的濃度大于周圍溶液的濃度,細(xì)胞會吸水以至脹破)
為什么要用力攪拌?
(可以加速血細(xì)胞和細(xì)胞核的破裂)
所以下一步驟過濾將濾去的是細(xì)胞膜和核膜等物質(zhì)。
在進(jìn)行步驟3時(shí),要向全班明確:這一步驟是這個(gè)實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵,注意加蒸餾水的方法和使用玻璃棒的方法,千萬不能太快太猛,防止打碎dna。
觀察濾取出來的黏稠物的顏色。有的同學(xué)提取的黏稠物較少,原因可能是在溶解dna時(shí)不充分,也可能是析出黏稠物時(shí)攪拌的快了。
將黏稠物再溶解時(shí)一定要充分,多攪拌。以免有dna損失。
加入冷酒精時(shí)動作要慢。
當(dāng)玻璃棒上出現(xiàn)絲狀物纏繞時(shí),繼續(xù)慢慢攪拌。至不再增加時(shí),取出吸干上面的水分。仔細(xì)觀察絲狀物呈什么顏色?(黃色)
這些絲狀物要用二苯胺鑒定。使用二苯胺時(shí)要注意不要接觸到藥液。進(jìn)行沸水浴時(shí),在實(shí)驗(yàn)室較為通風(fēng)的地方集體進(jìn)行。
利用沸水浴的5 min。
步驟3中加入蒸餾水的目的?與步驟1有什么區(qū)別?
(步驟3中加蒸餾水是使nacl溶液的濃度逐漸降至0.14mol/l,使dna的黏稠物析出。而步驟1加蒸餾水是為了讓細(xì)胞吸水脹破)
步驟7為什么要加50ml的冷酒精?
(因?yàn)閐na不溶于冷酒精,而其他物質(zhì)可以溶解在酒精中,使含雜質(zhì)較少的dna絲狀物可以析出。懸浮于溶液中)
現(xiàn)在大家從水浴鍋中拿出試管,比較兩個(gè)試管中溶液的顏色有什么不同?
(有絲狀物的試管變成藍(lán)色,另一試管還是原來顏色)
這一鑒定結(jié)果說明什么問題?
(提取出的絲狀物是dna)
那么你看到的絲狀物的粗細(xì)是不是dna分子的直徑呢?
(不是。dna分子直徑只有2nm。絲狀物是多個(gè)dna分子聚在一起形成的)
下面請同學(xué)們將實(shí)驗(yàn)用具,按原樣擺放整齊,實(shí)驗(yàn)桌要保持清潔。 今天我們通過實(shí)驗(yàn)將dna提取出來進(jìn)行了觀察和鑒定,那么dna的化學(xué)組成,分子結(jié)構(gòu)和復(fù)制是怎樣的?我們下節(jié)課再繼續(xù)研究。