多聚酶鏈式反應擴增DNA片段
2.2 實驗操作步驟
2.3 按照pcr反應體系配方配制反應液；
（2）將pcr反應體系50μl用微量移液器轉移到微量離心管（0.5ml）中；
（3）將微量離心管放到pcr儀中；
（4）設置pcr儀的工作參數。
（5）dna在pcr儀中大量擴增。
2.4 水浴法：將微型離心管依次在95℃、55℃、72℃的恒溫水浴鍋中循環處理相應時間。
3.實驗注意事項
3.1避免外源dna污染：所用儀器、緩沖液、蒸餾水等使用前高壓滅菌。
3.2緩沖液和酶分裝成小份，－20℃低溫保存。
3.3每添加一種反應成分，更換一個移液器的槍頭。
3.4混勻后離心處理，使反應液集中在離心管底部。
4.結果分析與評價
4.1反應液稀釋：取2µlpcr反應液，添加98µl蒸餾水；2.分光光度計調零：將100µl蒸餾水添加到比色杯中，在260nm處將分光光度計調整讀數為零。
4.2將100µl反應稀釋液倒入比色杯中，測定在260nm處的光吸收值。
4.3計算：dna含量＝50×光吸收值×稀釋倍數
（三）課堂總結、點評
（四）實例探究
例1 在（ ）的溫度范圍內，dna的雙螺旋結構解開
a. 10－20℃ b. 80－100℃ c. 20－30℃ d. 40－60℃
解析：蛋白質大多不能忍受60－80℃的高溫，而dna在80℃以上才會變性。
答案：b
例2 關于dna的復制，下列敘述正確的是（ ）
a.dna聚合酶不能從頭開始合成dna，只能從5’端延伸dna鏈
b.dna復制不需要引物
c.引物與dna母鏈通過堿基互補配對進行結合
d.dna的合成方向總是從子鏈的3’端向5’端延伸
解析：由于dna聚合酶不能從頭開始合成dna，只能從引物的3’端即復制方向由3’端向5’端延伸；由于dna分子是反向平行的，子鏈是依據堿基互補配對原則，在dna聚合酶作用下合成的，其合成方向是從子鏈5’端向3’端延伸。
答案：c
綜合應用
例3 下列有關pcr描述，不正確的是（ ）
a.是一種酶促反應
b.引物決定了擴增的特異性
c.擴增產量按y＝（1＋x）n
d.擴增對象是氨基酸序列
e.擴增對象是dna序列
解析：pcr是一種體外迅速擴增dna片段的技術，它以極少量的dna為模板，以四種脫氧核苷酸為原理，在引物的作用下使dna聚合酶從引物的3’端連接脫氧核苷酸，短時間內迅速復制上百萬份的dna拷貝，其擴增產量為y＝（1＋x）n，y代表dna片段擴增后的拷貝數，x表示平均每次的擴增效率，n代表循環次數，因此答案選d。
答案：d
課后探究
1、pcr與生物體dna復制有何區別？
2、如果在案件偵破過程中，只收集到一根毛發，但它所含的遺傳信息太少，該怎么辦呢？
★教后小記
教師在教學過程中，可以先引導學生回憶必修2的有關dna復制的知識，在此基礎上，學生可加深對于pcr原理的認識。對于pcr反應過程的教學，應以讀圖識圖為主。教材中反應過程圖解詳細的描繪了參與pcr的各種組成成分；每一輪反應的三個基本步驟—變性、復性、延伸；每一步驟的作用。教師在教學中可以請學生在讀圖的同時，結合教科書中的文字說明來加深理解。當學生遇到難以理解的地方時，教師要及時給予解答。