第四章、細胞與細胞工程
d.篩選和組織培養。
②優點:可以克服遠源雜交不親和的障礙。
3動物細胞工程:常用的技術手段有:動物細胞培養、動物細胞融合、單克隆抗體、胚胎移植、核移植。
(1)動物細胞培養: 細胞培養按細胞的來源不同可以分為原代培養和傳代培養。
a. 原代培養:培養的細胞直接來源于動物的組織叫原代培養。動物的組織可以取自胚胎,幼小的動物或成年的動物,可以是病理性的,特別是腫瘤組織。具體做法是:先將組織盡量剪碎,然后用胰蛋白酶液消化成分散的細胞,過濾除去纖維類物質,再把細胞放到培養液中培養。
b. 傳代培養:細胞在培養容器的表面長滿后,可以用胰蛋白酶把細胞消化下來,使其分散為懸浮的單個細胞,用培養液稀釋后,重新接種于新的培養容器中繼續培養。傳代細胞分為細胞株和細胞系兩大類。
應用:大面積燒傷病人的皮膚細胞的移植。單克隆抗體的制備。
(2)動物細胞融合:細胞融合是指兩個或兩個以上的細胞融合為一體的現象。它可以是自然發生的或人工誘導的。自然界中細胞融合是經常發生的,有性生殖中精卵結合是其中的例子。人工誘導的細胞融合是利用誘導劑使細胞或原生質體融合在一起。動物細胞融合要求掌握的情況與植物相似。如過程、方法、誘導條件(劑)、結果等。動物細胞融合常常用到的誘導劑是滅活的仙臺病毒,植物不用。
(3)單克隆抗體:抗體是由b淋巴細胞制造的。每一種淋巴細胞只制造單一特異性的一類抗體分子,但因為體內有大量的不同淋巴細胞,所以動物體內的抗體是一種混合物。如果能分離出單個的淋巴細胞,讓它形成一個克隆,那么這個克隆的所有細胞制造的抗體都是一樣的,這樣的抗體叫單克隆抗體。但是,在體外培養的條件下,一個淋巴細胞是不可能無限增殖的。
①雜交瘤細胞的制備過程:首先用抗原免疫小鼠,然后取免疫小鼠的脾臟細胞(含有大量的淋巴細胞),與體外培養的骨髓瘤細胞混合,以聚乙二醇誘導融合。將融合后的細胞放到選擇性培養基上培養,在這種培養基中只有雜交細胞可以成活,別的細胞死亡。將成活的雜交細胞克隆化培養,檢測能否產生抗體。要獲得單克隆抗體可以培養雜交瘤細胞,從培養液中分離抗體;也可以將雜交瘤細胞注射到小鼠的腹腔內,待其產生出腫瘤后,從腹水中分離出單克隆抗體。大量克隆抗體可以通過雜交瘤細胞的大規模培養來生產。
②單克隆抗體比起血清抗體的優點:首先,它特異性好,反應專一,只對單一的抗原決定起反應;其次,一旦制備成功,理論上就可以一勞永逸地大量生產抗體,不用這反復去免疫動物。
③單克隆抗體的醫學應用價值:由于單克隆抗體的高度特異性,在醫學檢驗中,被用來對各種傳染病和腫瘤的診斷、治療和預防具有重要意義。為了增強藥物抗癌的選擇性,可以制備針對腫瘤細胞的單克隆抗體,把一些毒素分子與此抗體相連,制成“生物導彈”,這樣就可以將藥物導向癌細胞靶子,不再對正常細胞造成傷害。