第一節(jié) 蛋白質(zhì)的提取和分離
[課標(biāo)要求] 嘗試蛋白質(zhì)的提取和分離 [知識(shí)梳理]一.背景知識(shí) 1.常用的蛋白質(zhì)分離提純技術(shù)有 和 等。其中 技術(shù)最為快捷靈敏，簡(jiǎn)便易行。 2.電泳現(xiàn)象： 。 3.電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì)的原理： 。 4.聚丙烯酰胺凝膠電泳（page）： 。 二.實(shí)踐案例——血清蛋白的提取和分離 1.材料用具（略） 2.活動(dòng)程序 （1）點(diǎn)樣： 新配制血清5μl，與 質(zhì) 量 濃 度 為0.4g/ml的 蔗 糖 溶 液 及 質(zhì) 量 分 數(shù)為 的 指示劑等體積混勻后，用 加樣器吸取5μl樣品，小心加到電泳樣品槽的膠面上。 （2）.電泳：打開(kāi)穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀的電源，將電流調(diào)節(jié)至 ma，待樣品進(jìn)入分離膠后，改為 ma,當(dāng)溴酚藍(lán)前沿距離硅膠框下緣 時(shí)，將電流調(diào)回零。關(guān)閉電源。 （3）.染色：取出凝膠，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 的 中，染色與 同時(shí)進(jìn)行，使染色液沒(méi)過(guò)膠板，染色 。 （4）.脫色：用體積分?jǐn)?shù)為 的 浸泡漂洗數(shù)次，每隔 更換脫色液，直至底色脫凈，背景清晰。 （5）.烘干膠板：將已脫色的凝膠板放在保存液中浸泡 然后將凝膠板放在兩層透氣玻璃紙中間，自然干燥即可獲得血清蛋白的電泳譜帶。 3.結(jié)果分析 （1）分析沒(méi)有出現(xiàn)電泳譜帶的原因 （2）通過(guò)辨認(rèn)電泳譜帶可初步判斷血清中蛋白質(zhì)的種類 三.探究活動(dòng) 1.牛奶中酪蛋白的提取和檢測(cè) 提取原理：當(dāng)ph= 時(shí)，酪蛋白的溶解度降低，并析出沉淀。用 除去酪蛋白中的脂肪后，即得到純的酪蛋白。 檢測(cè)原理：酪蛋白中的酪氨酸，能與 起顏色反應(yīng)，首先生成白色沉淀，加熱后變成 。 2.卵清蛋白的分離 用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)分離（同上） 四.意義 1.胰島素的提純 2.對(duì)細(xì)胞癌變做出診斷 [復(fù)習(xí)指導(dǎo)]本節(jié)課復(fù)習(xí)以聚丙烯酰胺凝膠電泳（page）為例，以電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì)的原理為基礎(chǔ)，注重電泳技術(shù)的主要的步驟，明確點(diǎn)樣、染色、脫色等在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中的地位，明確各步驟所用試劑以及它們的作用。 [典題解析]下列敘述正確的是（ ） a.蛋白質(zhì)中含有游離的氨基，是堿性電解質(zhì) b.蛋白質(zhì)中含有游離的羧基，是酸性電解質(zhì) c.蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中可以向與其自身所帶電荷相同的電極方向移動(dòng) d.蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中可以向與其自身所帶電荷相反的電極方向移動(dòng) [解析] 電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì)的原理：蛋白質(zhì)中既含有游離的氨基，又含有羧基，屬于兩性電解質(zhì)，并且蛋白質(zhì)在一定ph條件下帶有電荷，作為帶電離子，蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中可以向與其自身所帶電荷相反的電極方向移動(dòng)。 [答案] d。